SDS-PAGE jestprocedura naukowcy używają odrębnych białek na podstawie sposobu ich migracji przez żel . Żele te są wykonane z polimeru o nazwie poliakrylamidowym . Po dokonaniu żelu poliakrylamidowym , zaczyna się mieszaniną substancji chemicznych : akryloamid bisakrylamid , SDS i chemiczną bufor do stabilizacji pH. Dodając nadsiarczan i inny związek chemiczny o nazwie TEMED spowodujeakrylamid , tworząc długie łańcuchy lub polimeryzacji . Wszczęcie
jonowy nadsiarczan w nadsiarczan amonu jestrównoznaczne z dwóch powiązanych jonów siarczanowych przez słabego wiązania tlen -tlen . Ta więź może przylgnąć lub złamać na pół, otrzymując rodniki siarczanu — bardzo reaktywne cząsteczki z niesparowany elektron . Rodnik siarczanowy może reagować z wodą w celu wytworzeniarodnik hydroksylowy lub może reagować z monomerem, akryloamid , aby rozpocząć reakcję polimeryzacji. TEMED działa jak katalizator , który przyspiesza tempo, w jakim nadsiarczan jony tworzą rodniki .
Chain Reaction
Pohydroksylową lub siarczan radykalna utworzyła , atakuje monomer akryloamidu , biorąc jeden z elektronów w wiązania podwójnego . Monomeru akrylamidu jestrodnikiem o niesparowany elektron , więc przechodzi do ataku innego monomeru akrylamidu w podobny sposób. Ta seria zdarzeń tworzy szybko rosnący łańcuch monomerów akrylamidu połączonych wiązaniami pojedynczymi . Reakcja łańcuchowa tylko kończy się, gdy dwa rodniki reagują ze sobą . Imperium sieciowania
akrylamid były obecne na własną rękę , to nie tworzą gęsty żel trzeba na SDS-PAGE . Polimery muszą być usieciowane w celu utworzenia żelu o odpowiednich właściwościach , i że tam bisakrylamid wkracza podwójnych wiązań w bisakrylamid również służyć jako cel dla rodników w reakcji, jak również dlatego, że ma dwa miejsca , gdzie może być zaatakowany przez radykałów , to ostatecznie włączone do dwóch rosnących polimerów . W związku z tym , że polimery skończyć z wiązań między nimi w przypadkowych miejscach na długości każdego łańcucha .
Zbiory Rozważania
reakcja polimeryzacji jest bardzo szybki , więc gdy ” ve dodał TEMED i nadsiarczan , odbędzie się bardzo szybko . Czystość swoich odczynników jest ważne, ponieważ zanieczyszczenia mogą mieć wpływ na wyniki. Kwasu akrylowego , na przykład, mogą być dodawane do polimeru i stwarza miejsca jonowymienne , które mogą powodować miejscowe zmiany pH w swoim żelu . Uzyskany żel może nadal zawierać pewne monomer akryloamidu i akrylamid jestneurotoksyny , więc zawsze podejmować odpowiednie środki ostrożności podczas pracy z żelu SDS . Imperium