klonowania TOPO jestproces , który wykorzystuje się do klonowania , na ogół , 3 ‚ reszt , które są termodynamicznie niestabilne i łączy je za pomocą polimerazy DNA Taq . Ponadto, w procesie zastosowano produkt reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR ), świeży , które muszą być przechowywane w temperaturze 4 stopni Celsjusza. Ta forma klonowania optymalizuje aktywnego topoizomerazy cząsteczką dodawany na końcu liniowego wektora. Aby wykonać TOPO klonowanie ,pewien protokół powinny być przestrzegane . Przygotowanie
Niektóre podstawowe kroki można podjąć , aby przyspieszyć cały proces TOPO klonowania i zapewnić jej sukces . Po pierwsze, rury z żywych komórek należy umieścić na lodzie , aby utrzymać ich dopuszczalność . Następniebardzo optymalne hodowli (SOC ) medium wzrostu bakterii wzbogacone w składniki odżywcze , należy doprowadzić do temperatury pokojowej. Selektywne płytki powinny być następnie ogrzana do 37 stopni Celsjusza, dzięki czemu są w pełni gotowe, gdy przychodzi czas na ich używanie .
Połączeniu składników
, aby rozpocząć klonowanie Sposób ,mieszanina 2 mikrolitrów reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR ) produktu , 0.5 mikrolitrów roztworu soli i 0,5