? Zwykle każda cząsteczka DNA wewnątrz komórek zawiera dwa pasma połączone razem przez oddziaływania zwanych wiązaniami wodorowymi . Zmiana warunków może jednak ” denaturacji ” DNA i powodują, że te żyły do rozdzielenia. Dodanie silnych zasad , takich jak NaOH , co znacznie zwiększa pH , zmniejszając w ten sposób stężenie jonów wodoru w roztworze i denaturację dwuniciowego DNA. Wpływ pH
stężenie jonów wodorotlenku i pH mają bezpośredni związek , co oznaczawyższe pH , tym wyższe jest stężenie wodorotlenku . Podobnieniższestężenie jonów wodoru spada . Przy wysokich wartościach pH, następnieroztwór bogaty w jony wodorotlenkowe i te ujemnie naładowane jony wodorowe może ciągnąć się z cząsteczek , takich jak par zasad w DNA . Ten proces przerywa wiązanie wodorowe , która posiada dwie nici DNA ze sobą , co powoduje ich rozdzielenie .
RNA, w porównaniu z DNA
przeciwieństwie do RNA , DNA pozbawiony jest grupy hydroksylowej pozycji 2 ‚ w każdej grupie cukru . Ta różnica sprawia, że DNA znacznie bardziej stabilne w roztworze alkalicznym. W RNA ,grupa hydroksylowa w pozycji 2 ‚ może zrezygnować z jonów wodoru w roztworze przy wysokich wartościach pH , tworząc wysoce reaktywne jonem alkoholanowym , który atakuje grupę fosforanową gospodarstwa dwóch sąsiadujących ze sobą nukleotydów . DNA nie cierpią z powodu tej wady , a tym samym cieszy się niezwykłą stabilność przy wysokim pH .
Alkaline lizy
biologów molekularnych często korzystać z denaturacji alkalicznej do izolowania plazmidu DNA z bakterii. Plazmidy są małe pętle DNA oddzielają od chromosomu bakteryjnego . Lizy alkalicznej w miniprep biolodzy dodawać detergentów i wodorotlenek sodu do bakterii zawieszonych w roztworze . Detergent rozpuszcza błonę komórkową bakterii , podczas gdywodorotlenek sodu zwiększa się pH roztworu i pozwalasilnie zasadowy. Jak połamane komórki uwalniają swoją zawartość ,DNA rozdziela się wewnątrz swoich pasm lub denaturuje .
Reannealing
PoBiolog wyodrębnia się DNA z komórki , to dodaje się kolejny reagent powrotu rozwiązanie bardziej obojętnym pH i wytrącenia detergentu. Zmiana pH pozwala nici plazmidu do reanneal ; nieporęczne chromosom , jednak nie da się tego zrobić , więcbiolog może ją usunąć wraz z detergentem , skażone białek i innych róźnych śmieci , pozostawiając plazmid tyłu. Alkalicznej lizy nie całkowicie oczyszczania plazmidowego DNA ; raczej , że służy jako” szybkie i brudne ” sposób, aby wydobyć go z komórki i usunąć większość innych zanieczyszczeń . Imperium