Western, technikę analityczną do wskazania określonego białka w danej próbce , wykorzystuje zdolność enzymu lub znakowane fluorescencyjnie drugorzędowego przeciwciała do wiązania się z jego określonym antygenem . Jesttrzystopniowy proces rozpoczynający się elektroforezie na żelu , a następnie blotting i wykrywanie membrany z przeciwciałami . Wykrywanie białka może być bezpośrednie lub pośrednie, z tym ostatnim za pomocą znakowanego wtórnego przeciwciała skierowanego przeciw pierwotnej. Choć przyjęte jako rutynowej metody analizy białek , Western blot ma ograniczenia , jak i korzyści . Zaleta: Czułość
Jednym z największych argumentów przemawiających za western blot jest jego wrażliwość . Ze względu na swoją zdolność do wykrywania jak najmniej 0,1 ng białka w próbce ,technika może teoretycznie być skutecznym początku narzędzia diagnostycznego wykrywania nawet najmniejszego odpowiedź immunologiczną z wirusa lub bakterii w próbce pacjenta. Pośrednia Western blot ponadto opiera się na tej wrażliwości od zdolności wtórnego przeciwciała amplifikacji intensywność sygnału wykrytego przez system przetwarzania obrazu. Większa czułość oznacza , że mniej przeciwciał do badania są potrzebne , co zmniejsza koszty laboratoryjnych znacznie
Zaleta: . Specyfika
western blot zawdzięcza swoją technikę specyficzność dwóch dużych opłaca składki czynniki . Po pierwsze , elektroforeza żelowa sortuje się próbkę do białka o różnej wielkości , ładunku i budowy . Proces sam w sobie jestogromny krok w kierunku wykrywania , jak zespoły utworzone w żelu już dać wskazówki co do wielkości białka lub polipeptydu. Specyficzności oddziaływania przeciwciało- antygen, służy jako drugi duży współczynnik. Ponieważ specyficzne przeciwciała wykazują powinowactwo do specyficznych białek ,proces może selektywnie wykryć białko docelowe nawet w mieszaninie 300.000 różnych białek Foto Foto Foto Foto Wada: . Skłonność do fałszywych lub subiektywnych Wyniki
pomimo jego czułości i swoistości ,western blot może nadal produkować błędnych wyników. A fałszywie dodatnie wyniki , gdyprzeciwciało reaguje z nie ma białka , co jest , co często dzieje się, gdypacjent jest badany przez HIV zdarza się mieć gruźlicę lub liczbę infekcji pasożytniczych . Fałszywie negatywne , z drugiej strony, może łatwo spowodować gdy większe białka nie są wystarczająco dużo czasu , aby przenieść odpowiednio do membrany . Niewłaściwe blot i przetwarzania często wytwarzają przekrzywiony , wyblakłe , lub nawet wiele zespołów , dzięki czemu wyniki badań przedmiotem interpretacji technika Foto
Wada: . Wysokie koszty i popyt techniczne
< p >koszt western blot jest złożony z dużych wydatków dla poszczególnych znakowanych przeciwciał, wykwalifikowanych analityków i sprzętu laboratoryjnego . Delikatny proces , western wymaga precyzji na każdym kroku dla właściwej identyfikacji składników próbki jest . Drobny błąd w odczynnika koncentracji lub w okresie inkubacji mogą być katastrofalne dla całego procesu . Wreszcie ,wyposażenie niezbędne do wykrywania i obrazowania – systemów wykrywania laserowych chemiluminescencyjne , fluorescencyjne, radioaktywne , lub – może być zbyt drogie dla przeciętnego zespołu mikrobiologii
.