Roślina materia organiczna składa się z wielu ogniw , z których każde zawierają cząsteczkę DNA, która przechowuje instrukcje do wzrostu i funkcji. Naukowcy mogą chcieć się uczyć część lub całość materiału genetycznego obecnego w komórkach , a więc trzeba bezpiecznie wydobyć DNA z materiału konstrukcyjnego maszyny komórkowej otaczającej it.Things musisz Łódź 2 gramów liści
tłuczek i moździerz
wirówki Obrazów łaźni wodnej Obrazów równowagi Obrazów gazę Obrazów 15 ml probówek do wirówek Sześciu
Jedna rurka
Eppendorf 1,5 ml 100ml buforu Foto CTAB Ekstrakcja 2ml Beta -merkaptoetanol
7 ml 24: 1 chloroform : alkoholu izoamylowego mieszaninę
50 mikrolitrami RNAzą a w stężeniu 10 mg /ml
Pipety
6ml izopropanol
2 ml 70% etanolu
1 ml sterylnej dejonizowanej wody
Pokaż więcej instrukcji
1
Wypełnij łaźni wodnej do zalecanego poziomu z wodą , która zmienia się w specyfikacji każdego producenta , i włącz go. Ustaw łaźni wodnej do 65 stopni Celsjusza i pozwolić mu przyjść do temperatury . Umieścić pojemnik izopropanolu w lodzie. Ustawienie wirówki przy 3000 obrotach na minutę , w temperaturze 20 stopni Celsjusza.
2
Odważyć 2 g liści na wadze i umieścić je w moździerzu. Dodano wystarczającą ilość beta – merkaptoetanol pipetą do pojemnika buforu do ekstrakcji w takiprodukt końcowy składa się z jedną do dwóch procent beta – merkaptoetanolu . Na przykład , jeśli masz objętość buforu , który mierzy około 100 ml , a następnie dodać 2 ml beta- merkaptoetanol do pojemnika i dokładnie wymieszać . Foto Foto Foto 3
pipet 7 ml buforu do ekstrakcji do zaprawy . Rozdrobnić mieszaniny jednorodnej cieczy z tłuczkiem.
4
Fold cheesecloth dla utworzenia czterech warstw. Odcedzić i wycisnąć płyn przez warstw w 15 ml probówce wirówki .
5
Umieścić probówkę w łaźni wodnej o 30to 60 min nut . Wirować rurkę , aby wymieszać zawartość każdy kwadrans . Pozostawićrury do ochłodzenia do temperatury pokojowej, popełny okres czasu wynosi .
6
uzupełnićrury z mieszaniny chloroformu i alkoholu izoamylowego ( to jest 24 części chloroformu jednej części alkoholu izoamylowego ), dzięki czemu rurka zawiera mniej więcej połowa próbki i pół nowy dodatek cieczy . Zamknąć probówkę i obrócić do góry nogami kilka razy powoli, tak mieszanek płynów .
7
Umieść probówkę w wirówce i niech się kręcić przez 10 minut .
8
Miejsce 50 ml RNAzy a do nowej probówki wirówkowej . Pipetą supernatant (jasne warstwy na wierzchu rury powyżej białej warstwy odłamków ) w pierwszym przewodzie wyłączenia i przenieść ją do drugiej rury. Zamknięto probówkę i odwrócić ją kilka razy w celu wymieszania składników razem. Trzymać probówkę w temperaturze pokojowej przez godzinę .
9
Wykonaj kroki 6 i 7 na nowo dwa razy więc masz jasną probówkę . Następnie pipety do 9 ml klarownego płynu z końcową rurę do nowej probówki . Dodać 6 ml izopropanolu i odwrócićrur 10 razy w sposób łagodny , takDNA wypada z roztworu i w postaci substancji stałej. Następnie probówkę wiruje się przez 10 minut, co powinno utworzyć osad DNA w dolnej części rury.
10
Wylać płyn w rurze takpozostaje osad . Odmierzyć pipetą 2 ml w 70 % etanolu i powtórnie umieścić w wirówce przez pięć minut. Wylać część cieczy ponownie. Użyj sterylnej końcówki pipety odebrać osad i przenieść go do sterylnej 1,5 ml probówce typu Eppendorf . Pipetować 200 mikrolitrów jałowej wody dejonizowanej i pozwolićDNA rozpuścić całkowicie w cieczy, która może trwać przez noc. Próbka jest gotowa do analizy .