odczynnik Sanger jest używany do określenia sekwencji aminokwasów tworzących peptyd. Odczynnik zatrzask – lub tag – aminokwas na końcu łańcucha peptydowego , znany również jako N -końcu . Peptyd może być podzielony na części ( hydrolizuje ), a pojedyncze aminokwasy badano stosując różne metody chromatograficzne . Niezależnie od aminokwasu prowadziznacznik jestw jednym końcu. Odczynnik Sanger znany jest również jako dinitrofluorobenzenem ( DNFB ) . Po jej uczepił aminokwasu , jest określany jako DNF- compound.Things będzie potrzebne Foto skali laboratoryjnej
Rękawice
Okulary ochronne
wirówki Obrazów Probówki
Pipety Pasteura
destylowana woda
4,2 % roztworu wodorowęglanu sodu Foto Sanger za odczynnika ( FDNB )
pH papieru
eter dietylowy Obrazów 6M roztworu kwasu solnego Obrazów acetonu Obrazów test rura
Pokaż więcej instrukcji
1
Odważyć 3 miligramów peptydu na skalę . Umieścić w probówce wirówki . Dodać około 0,3 ml wody, 0,3 ml odczynnika Sangera i 0,075 ml roztworu kwaśnego węglanu sodu.
2
Pozwalawirówki do inkubacji w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Podczas inkubacji probówkę delikatnie potrząsnąć , aby zapobiec rozłączeniu mieszaniny . Sprawdzić pH roztworu na 15 minut z papierkiem wskaźnikowym . PH powinno być utrzymywane powyżej 9 . Jeśli zaczyna spadać , dodać niewielką ilość wodorowęglanu sodu ( około jednej kropli z pipety Pasteura ) .
3
Po inkubacji dodać 1.5 ml wody,równą ilość eteru . Pozostawićroztwór do rozdzielenia warstw . Być może trzeba będzie wirować mieszaninę do tego oddzielić . Usuń warstwę eteru (górną warstwę ) , żółty z pipety i wyrzucić ją .
4
Dostosować pH w dół do 1,0 dodając powoli kwas solny . Dodać trochę kwasu na raz , delikatnie mieszamy , a następnie sprawdzić pH papierkiem wskaźnikowym . W sumie powinno wymagać około 0,15 ml kwasu. Jeśli pH spadnie poniżej 1,0, dodać niewielką ilość (nie więcej niż spadek ) kwaśnego węglanu sodu .
5
Dodać 3 ml eteru . Pozostawićmieszaninę do rozdzielenia. Terazgórna warstwa (żółty , eter warstwa ) zawiera swoją DNP – związek . Używając pipety , dokładnie wyodrębnić tę warstwę i przenieść ją do czystej probówki. Umieścić probówkę na bok i pozwolićna odparowanie cieczy , pozostawiającsuche, żółte ciało stałe .
6
umyć ciało stałe z acetonem . Dodaj 0,3 mililitrach acetonu , mieszając delikatnie i ekstrahować cieczy z pipety. Dodać 0,75 mililitrach kwasu w probówce. Twój peptyd jest teraz oznaczone i gotowe do hydrolizie i analizowane metodą chromatografii wyboru. Imperium