Kiedy wiązania kwasów nukleinowych lub białek ,wiązanie materiału wysokiej nazywane PVDF ( difluorek winylu ) membrana zapewnia wsparcie dla przeciwciał . Przez Western biot , membrany są ułożone razem przygotowane do przeciwciała , a następnie suszy. Protokół do suszenia membrany wymaga wiedzy o tym, jak działa błony , płyty katodowe , płyt anodowych i stosowania roztworów metanolu. Przy prawidłowym protokołumembrana bezpiecznie łączy się z specyficznym przeciwciałem, i jest gotowy do natychmiastowego użycia lub składowania. Przygotowanie błony
Przygotowanie membrany PVDF oczyszcza i stabilizuje błony przed przeniesieniem. Przed suszeniemmembrana ” zablokowany” aby zapobiec wiązania z niczego innego niż specyficznych kwasów nukleinowych , takich jak niespecyficznych przeciwciał . Podczas tej procedury mokre membrany przez nałożenie go na płaskiej powierzchni pokrytej w metanolu . Membrana zmienia kolor w tym zdaniu , z nieprzejrzystej w półprzezroczysty . Po zakończeniu pracy z łaźni metanol ,membranę umieszczono w dejonizowanej wodzie do wygrzewania przez około dwie minuty. Membrana musi wtedy ponownie zanurzyć w roztworze metanolu , który jest silnie kwasowy . Łódź
zespołu membran przed przeniesieniem
Dwa wyd membranowych są moczone w pierwszym roztworze metanolu i umieszczono na płycie anodowej . Podczas tego procesu , należy dokładnie sprawdzić, do uwięzionych pęcherzyków powietrza , które mogą zagrozić transferu . Kolejny kawałek bibuły filtracyjnej jest moczony w drugim roztworze metanolu i umieszczone na górze stosu. Żel następnie przechodzi w górnej membranie , ostrożnie , aby nie zatrzymać pęcherzyków powietrza między membraną i zastosowaniu żelu . Trzy nowe kawałki papieru są następnie moczone w buforze katody i umieszczona na wierzchu żelu. Jeśli wystąpią jakiekolwiek pęcherzyki powietrza ,probówka działa wygładzić błony . Imperium transferu
W tej części procesu , łączenia wysokiego napięcia przewody do zasilania i zastosowanie stałego prądu do obszaru żelu na membranę , przez 30 minut . Czasy przenoszenia są różne w zależności od rodzaju przeciwciał . Po 30 minutach wyjąć zasilacz i membranę przelewu . Prawy dolny róg membrany jest następnie wyciąć , by sprawdzić orientację . Pierwsze dwie warstwy bibuły filtracyjnej są odrzucane , w tym żelu. Zespoły z masy cząsteczkowej są oznaczone długopisem .
Suszenie
Po zakończeniu transferu , suchość błony w jeden z dwóch sposobów . Dla szybszego suszeniamembrany zanurza się w 100 procent metanolu w ciągu 10 sekund w celu usunięcia jakichkolwiek wody. Membrana następnie spoczywa na kawałku ręcznika papierowego przez 15 minut. Dla wolniejszego metodą suszenia,membrana jest umieszczona na ręczniku papierowym bez dodatku metanolu. Po wysuszeniu ,membrana może być używany lub przechowywany w suchym pojemniku w 4 stopniach Celsjusza do wykorzystania w przyszłości . Imperium