Potencjał wodoru lub pH jestmiarą kwasowości lub zasadowości cieczy. Ważne jest, w wielu dziedzinach , w tym biologii , chemii i nauk o środowisku . PH pomiar jest prosty , w większości sytuacji . Papierek lakmusowy można wprowadzać do cieczy , azmiana koloru papieru określa stopień, w jakimpłyn jest kwasem lub zasadą. W przypadku, gdypłyn do testowania jest wewnątrz komórki , inne sposoby mają być devised.Things co trzeba Łódź 2 ‚, 7’ – bis -( 2 = karboksyetylo )-5 ( i -6) – karboksy ( BCECF ) lub inna substancja , która ma zmianę fluorescencji w różnych warunkach pH Zbiory fluorescencji spektrofotometru z podwójnymi monochromatorów , lub podobnego urządzenia do pomiaru fluorescencji
Wirówka
Wyniki góry określonych krzywych kalibracji pomiaru korelacji wewnątrzkomórkowego BCECF i cytoplazmatyczny pH
Pokaż więcej instrukcji Katowice 1
schłodzenia temperatury próbki komórek do 41 do 50 stopni Celsjusza . Pozwala to na większą szybkość absorpcji materiału fluorescencyjnego przez komórki .
2
obciążenia próbki komórek z indukcji fluorescencji substancji takich jak BCECF . Odbywa się to przez dodanie do pożywki BCECF komórek , a następnie mieszaninę reakcyjną miesza łagodnie przez 2,5 godziny. BCECF jest wchłaniana przez przepuszczalne błony komórek.
3
oddzielenia komórek od pożywki i niewchłonięty BCECF uruchamiając próbki przez wirówkę . Umieścić komórek w oddzielnym pojemniku.
4
Ogrzewać próbkę komórek do 98,6 stopni Celsjusza przez 30 minut , aby zbliżyć się do warunków w organizmie człowieka. Jeżeli komórki poddane badaniu normalnego życia w innym środowisku , niż do ludzkiego ciała , koryguje próbki do odpowiedniej temperatury.
5
wzbudzania próbki komórek przez mieszanie. Przyczynia się to do zwiększenia aktywności fluorescencyjne.
6
Pomiar intensywności fluorescencji próbki komórek, stosując spektrofotometr . Aby uzyskać najlepsze wyniki, należy używać wzbudzenia światłem o długości fali od 500 do 510 nanometrów . Przy tych długościach fali jestwiększa rozpiętość intensywności fluorescencji , tak że jest łatwiejsze do odróżnienia wyniki. Intensywność fluorescencji jest mierzona w jednostkach względnej fluorescencyjnych ( RFU ) ,stosunek jasności substancji w stanie wzbudzonym , fluorescencyjnym do swojego normalnego stanu unexcited . WyższaRFU ,jaśniejszesubstancji , w stosunku do stanu normalnego .
7
Porównaj wyniki spektrofotometru do pre -drawn krzywych kalibracji . Na ogół , wyższa fluorescencyjny oznacza wyższą pH w próbce. Przy długości fali wzbudzenia 510 nm ,substancja o wartości pH 6.4 będzie wykazywać RFU około 20 , asubstancja o pH 9,9 nie wykazują RFU około 55 .